答：干燥后的引物质地非常疏松，开盖前需先离心，将引物粉末收集到管底。根据说明书上的公式计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。

溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5），引物在这种条件下不稳定。

2、 如何保存引物？

答：引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成片状物质。溶解前的引物在室温状态下可以长期保存。溶解后的引物-20度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。修饰荧光引物需避光保存。

3、测序发现引物有突变是怎么回事？

答：测序发现引物区域有突变，特别是40个碱基以下的引物，发生的概率很小，但是也会存在。您所提交引物序列一般是通过电脑直接COPY到合成仪的，我们也有一套控制办法，预防碱基输入错误，基本不存在人工输错的现象。

引物合成是一种多步骤的化学反应，合成效率最高为99%，副产品不可以避免。在合成过程中，造成碱基插入，缺失，置换突变的因素客观存在。引物序列中插入突变往往是碱基重复，一般认为，偶连过程中，正在偶连的部分单体发生丢失DMT，导致单体又接了上去，故发生插入同一碱基的突变。缺失突变，一般认为是带帽(capping)反应不彻底造成的，Caping反应主要是封闭极少数5'-羟基没有参加反应单体。被封闭的引物，在下一轮偶连时将不能继续参与合成。对于碱基置换的突变，产生的原因一般认为是碱基不能100%脱保护，即引物上可能含有残留保护基团，引物的这些区域不能很好地与互补链配对，当扩增的产品被亚克隆转化到大肠杆菌中，可能被细菌中修复系统补上了非配对的碱基。置换突变通常发生在G 转换成其它碱基。碱基G在一定条件下可以转化为烯醇异构体 （脱嘌呤），2,6 diaminopurine , DNA复制和扩增过程中DNA聚合酶将2,6 diaminopurine看作碱基A，测序就会发现碱基G-A置换。脱嘌呤现象在富含嘌呤的引物中发生的频率较高。脱嘌呤的引物在引物后处理脱保护阶段如果被降解，测序就会发现碱基G或A的缺失。

目前引物突变的问题并没有办法彻底解决，一些降低突变发生的频率建议和措施还停留在实验室阶段，不能应用于规模化生产。引物合成的固相合成原理都一样，采 用的机器也基本相同，合成主要原料都是由可数的几家跨国公司提供的，所有合成服务商都会遇到类似问题，没有人可以超脱。

4、如果测序发现突变，该如何处理？

答：遇到这种情况，您应当首先和我们取得联系，我们的生产人员会检查生产的原始记录，核对合成序列是否和定单一致。如果确认引物合成序列没有输错，我们建议重新挑取克隆测序。根据我们经验，40个碱基以下的引物，测1-2个克隆就可以了；40个 以上的特别是用于全片段拼接合成的，需要多测一些。一般情况下，每个克隆突变的位点都不一样，提示正确的总是有的，就是如何找到它。您也可以要求我们将引 物免费重合一次，不过重合的引物和第一次的引物一样，都可能含突变，不会因为重合的引物就减少您的遇到问题的几率。基因拼接过程中，如果发现一段区域突变 点不多，就多测几个，否则就重合一下引物。

5、引物不纯会有什么后果？

答：引物不纯可能会导致：1)非特异性扩增；2)无法用预先设计在引物5'端酶切位点的酶切开，特别是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。

6、拿到引物后，想在实验室检测纯度，如何实现？

答：实验室可通过变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳进行引物纯度的检测：

使用加有7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，碱基数≤12个的引物用20%的胶，12-60个碱基的引物用16%的胶，＞60个碱基的引物用12%