技术专题
蛋白样品脱盐处理方法比较
文章来源:genecreate
作者:genecreate
发布时间:2019-02-19 17:30
蛋白大分子脱盐要求在样品制备中经常遇到,选择合适的脱盐方法显得非常重要;在蛋白回收率、脱盐效率、蛋白生物活性、操作难易程度、耗时等方面需要综合考虑,找到合适的脱盐方式。
下面对透析法、超滤法、脱盐柱法三种常用的脱盐方式做一个对比分析,为今后选择合适的脱盐方法作为参考。
一、透析法特点:(性价比低)
1.时间长(需要过夜)
2.需要大体积的缓冲液
3.透析袋使用前处理繁琐
4.透析袋可能会破,导致样品丢失,重复使用次数少
5.样品易沉淀失活
6.价格相对低
二、超滤法特点:(性价比一般)
1.时间较长
2.重复使用次数少
3.操作简单
4.蛋白回收率低
5.蛋白易失活
6.价格较高
三、脱盐柱法特点:(性价比高)
1.时间短
2.重复使用次数多
3.操作简单温和不易失活
4.蛋白回收率高
5.价格相对低
脱盐柱法案例
层析柱:1.6cm*20cm中压玻璃层析柱,装填千纯生物Pudex G25 medium填料(柱体积40ml)
样品:IgG、BSA、Lysozyme(各1mg/mL)
上样量:流速为50cm/h时,上样量为3mL(柱体积的7.5%);流速为100cm/h和150cm/h时,上样量为8mL(柱体积的20%)
下面对透析法、超滤法、脱盐柱法三种常用的脱盐方式做一个对比分析,为今后选择合适的脱盐方法作为参考。
一、透析法特点:(性价比低)
1.时间长(需要过夜)
2.需要大体积的缓冲液
3.透析袋使用前处理繁琐
4.透析袋可能会破,导致样品丢失,重复使用次数少
5.样品易沉淀失活
6.价格相对低
二、超滤法特点:(性价比一般)
1.时间较长
2.重复使用次数少
3.操作简单
4.蛋白回收率低
5.蛋白易失活
6.价格较高
三、脱盐柱法特点:(性价比高)
1.时间短
2.重复使用次数多
3.操作简单温和不易失活
4.蛋白回收率高
5.价格相对低
脱盐柱法案例
层析柱:1.6cm*20cm中压玻璃层析柱,装填千纯生物Pudex G25 medium填料(柱体积40ml)
样品:IgG、BSA、Lysozyme(各1mg/mL)
上样量:流速为50cm/h时,上样量为3mL(柱体积的7.5%);流速为100cm/h和150cm/h时,上样量为8mL(柱体积的20%)
流速(cm/h) | 蛋白峰(mL) | 半峰宽(mL) | 盐峰(mL) | 半峰宽(mL) | Rs |
50 | 15.21 | 3.29 | 30.67 | 5.3 | 1.7998 |
100 | 19.21 | 7.7 | 33.33 | 8.78 | 0.86 |
150 | 18.56 | 8.42 | 34.09 | 8.82 | 0.9 |
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