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金开瑞为您介绍ELISA方法大全
文章来源：未知
作者：genecreate
发布时间：2017-09-22 16:41
ELISA试剂盒种类繁多，根据原理可大致分为间接法、夹心法、竞争法、捕获包被法（也称为反向间接法，比较少见）。其中各类型试剂盒的基本原理可以参考：【蛋白研究系列专题】-12丨ELISA方法知多少？，以下为各类型ELISA试剂盒的抗原抗体连接顺序及适用类型：
注：
▌：吸附介质；/：竞争关系；-：结合
Ag：抗原（antigen）；sAg：固相抗原；lAg：游离抗原（即待测抗原）；Ag*：酶标抗原
Ab：抗体（antibody）；sAb：固相抗体；lAb：游离抗体（即待测抗体）；Ab*：酶标抗体（或酶标二抗）
lIgM：游离IgM
被测物以红色表示
上面的方法涉及到的是比较简单的方式，在实际运用中则会进行一些改良，下面举几个栗子！
直接法：直接用酶标抗体结合抗原，或者直接用酶标抗原结合抗体。间接法：间接用酶标二抗结合特异性识别抗原的抗体。下面的栗子帮助大家理解。
栗子1
表中列出的两种夹心法属于直接夹心法，间接夹心ELISA则是基于两种不同种属来源的抗体，与直接法相比具有更高的灵敏度，常用来检测低丰度抗原样本。间接夹心ELISA的抗原抗体连接顺序为：▌-sAb1(species 1)-lAg-Ab2(species 2)-Ab*，当然也不一定非要不同物种的抗体，使用同一物种的抗体也可以是这样的连接顺序：▌-sAb Fab-lAg-lAb(same species)-anti Fc Ab*。
栗子2
竞争ELISA方法灵活性强，在实际应用中衍生出了许多不同的检测方式，除了表中列出的直接竞争法，还有间接竞争法、夹心竞争法等，这些方法是将间接法和夹心法进行重新组合得到的更为复杂的检测方法。
间接竞争法的抗原抗体连接顺序为：▌-sAg/lAg-Ab-Ab*，或者▌-sAg-Ab/lAb-Ab*酶标二抗。这种方法比直接法进一步放大信号，故灵敏度更高。
夹心竞争法从原理上分可以有四种，实际中运用的多是：▌-sAb-Ag/lAg-Ab*，例如ICTP检测试剂盒就是用这种方法开发的。
栗子3
捕获包被法应用于TORCH检测时，其抗原抗体连接顺序为：▌-s anti IgM Ab-lIgM-Ag*，这样省去了常规方法中的酶标抗体。
各种ELISA检测方法各有利弊，针对不同的抗原、抗体的性质，在开发试剂盒时需要根据各自的性质进行设计和不同的尝试，最终才能得到一个性能良好的试剂盒。
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