技术专题
蛋白质-蛋白质相互作用研究
文章来源：未知
作者：genecreate
发布时间：2017-06-03 17:02
在所有细胞中，蛋白质是最重要的组成部分，并且在大多数细胞功能中蛋白质间的相互作用是最基本的活动。蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，蛋白质—蛋白质互作网络是生物信息调控的主要实现方式，是决定细胞命运的关键因素。研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活动的基础，是后基因组时代最重要的研究领域之一。
金开瑞依托六大核心技术平台，提供独有的AP-SWATH及酵母双杂交、噬菌体展示、免疫共沉淀（Co-IP）、GST融合蛋白沉降（GST-pull down）等经典蛋白-蛋白相互作用研究技术服务，帮助您理清转录调控过程，发现互作蛋白，加速研究进程。
一、AP-SWATH
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）是瑞士苏黎世联邦理工学院的Ruedi Aebersold 博士及其团队与AB-SCIEX联合推出的一项全新的质谱技术。具有灵敏度高、可重现性高、定量准确度高、线性动态范围广、通量大等特点。
金开瑞借助高精度质谱平台，开发了一套从实验到生物信息分析的AP-SWATH流程，采用TAP技术将目标靶蛋白的相互作用蛋白特异性富集，然后结合具有高灵敏度、高准确度、高通量等特点的SWATH定量，能够高特异性的准确富集到靶蛋白的特异性相互作用蛋白，实现复合蛋白质的准确鉴定。
二、酵母双杂交
酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后，诱饵蛋白结合于报道基因的启动子，启动报道基因在酵母细胞内的表达，如果检测到报道基因的表达产物，则说明两者之间有相互作用，反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。
金开瑞提供酵母双杂交文库构建和筛选技术服务，基于较齐全的cDNA文库，通过将已知基因作为诱饵，从选定的文库中筛选出与诱饵蛋白存在特异相互作用的蛋白，材料用量少，获得全长的比例高。
三、噬菌体展示
噬菌体展示技术通过将外源肽段和噬菌体衣壳蛋白融合展示于噬菌体表面，进行高通量筛选及富集，并对所需功能的克隆进行定性分析，展示对象涵盖抗体、抗体片段、肽段、cDNA等。该技术也可用来研究蛋白之间的相互作用，不仅有高通量及简便的特点，还具有直接得到基因、高选择性的筛选复杂混合物、在筛选过程中通过适当改变条件可以直接评价相互结合的特异性等优点。
金开瑞噬菌体平台除提供互作蛋白筛选外，还提供抗体库构建、抗体片段库构建、双特异性抗体定制及抗体人源化服务。
免疫共沉淀也是研究蛋白-蛋白相互作用的一种经典技术，是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀，可以检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用，也可以确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内天然与兴趣蛋白结合的，符合体内实际情况，得到的蛋白可信度较高。
金开瑞检测分析平台提供包括Co-IP在内的IHC、WB、ELISA、IF、ChIP等各种免疫学检测技术服务，成熟的免疫学检测体系，经验丰富的技术员，优良的实验环境，并结合完善的实验平台，从实验数据相互印证、文章投稿的充实性等方面为您提供最优质的服务。
五、GST融合蛋白沉降（GST-pull down）
蛋白质相互作用的类型有牢固型相互作用和暂时型相互作用两种。牢固型相互作用以多亚基蛋白复合体常见，最好通过免疫共沉淀(Co-IP)或Pull-down技术研究。Pull-down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-)，从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过Pull-down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系，从体外传路或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。
金开瑞所提供的GST pull down检测技术服务，使用特异性二抗进行检测，能有效避免抗体重链对结果的信号干扰，显著提升检测效果。
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