凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究蛋白质和DNA序列相互结合的技术,可用于定性或定量分析。
蛋白质可以与生物素标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。
目的蛋白与生物素标记的DNA探针结合,电泳时蛋白-DNA复合物比无蛋白结合的DNA探针在凝胶中泳动的速度慢,显影出现相对滞后条带。
用于验证探针是否含有可与蛋白质结合的位点。将结合位点突变,以突变探针为对照,野生型探针出现迁移条带,而突变探针未出现迁移条带,则说明该探针含有可与蛋白质结合的位点。
探针序列不变,不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋白结合,冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照,标记探针出现迁移条带,而冷探针迁移条带减弱或消失,则排除了假阳性干扰,增加实验结果准确性。
使用目标蛋白的特异性抗体,蛋白-探针复合物被抗体识别并结合,该三聚复合物在凝胶电泳中,迁移速率再次增大,出现在蛋白-探针复合物的上方的超迁移条带,验证了探针与目的蛋白的特异性结合。
● 亦可用于研究RNA结合蛋白和其相关RNA序列的相互作用。
● 如需要做超迁移,需提供IP级别的抗体。
● EMSA与酵母单杂交,可共同验证同一个问题。
● 提取总蛋白
项目 | 数量 | 单价 | 总价 | 周期 |
---|---|---|---|---|
蛋白提取与WB验证 | 1 | 300 | 300 | 5 |
DNA探针合成(<60bp) | 1 | 450 | 420 | 12 |
EMSA | 1 | 4500 | 4200 | 20 |
报价 | 5250 | 37 | ||
优惠价 | 3675 | 37 |
● 蛋白表达与纯化
项目 | 数量 | 单价 | 总价 | 周期 |
---|---|---|---|---|
基因合成 | n | 0.8 | 0.8*n | 15 |
载体构建与足量提取 | 1 | 800 | 800 | 5 |
小量表达 | 1 | 800 | 800 | 10 |
大量表达及纯化 | 1 | 4000 | 4000 | 18 |
DNA探针合成(<60bp) | 1 | 450 | 450 | 12 |
EMSA | 1 | 4500 | 4500 | 20 |
报价 | 10550+0.8*n | 68 | ||
优惠价 | 6875+0.8*n | 68 |
Nuclear factor kappa B/p65 plays a positive role in peroxisome proliferator-activated receptor δ expression in orange-spotted grouper , Epinephelus coioides.
期刊:Fish and Shellfish Immunology IF:3.298 发表时间:2020
Binding reactions of Ecp65 and EcPPARδ promoter. Biotin-labelled EMSA probes are incubated with lysates of HEK293T cells including Ecp65 protein. WT, wild-type probe; MT, mutated probe. Positive control indicates EcPPARδ+Protein, negative control indicates EcPPARδ-WT.
文章中EMSA实验由本公司提供相关服务。
Functional Analysis of IRF1 Reveals its Role in the Activation of the Type I IFN Pathway in Golden Pompano, Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758).
期刊:Int J Mol Sci. IF:4.183 发表时间:2020
Binding reactions of IRF1 and ToIFNa3 prompter. Biotin-labeled EMSA probes were incubated with lysates of HEK293T cells containing ToIRF1 protein.WT,wild-type probe;MT:mutated probe.1,negative control;2,positive control;3,plus ToIFNa3-P2-WT5;4,ToIFNa3-P2-WT5 plus ToIRF1-Flag;5,plus ToIFNa3-P2-MT5;6,ToIFNa3-P2-MT5 plusToIRF1-Flag.
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